Påvisning av vevsstrukturer, antistofferog patogener ved immunmerking er populær, moderne og nøyaktig. Immunfluorescens refererer til immunmerking med preparert fluorescerende antistoffer som er laget for å gløde under UV-lys. Ved direkte immunfluorescensdeteksjon undersøkes testsubstratet direkte med selvlysende antistofferuten oppstrøms primære antistoffer eller kunstige antigener.
Hva er direkte deteksjon av immunfluorescens?
Tumorspesifikke antigener i tumorvev kan påvises direkte med immunfluorescens. Dermed er det mulig å finne ut hvor i kroppen den eksisterende metastaser kom fra. Immunfluorescens direkte påvisning er en diagnostisk metode basert på funn innen immunologi, immunfarging og immunhistokjemi. Fokus her er på antistoffers evne til å binde seg til spesifikke steder i vev eller på antigener i et serum. Disse nettstedene er epitoper. I biokjemisk diagnostikk er det kunstige antistoffer eller mimetika (singular: mimetic) som tillater merking av disse antistoff-antigenbindinger ved fluorescens eller radioaktivitet. Kunstige antistoffkonjugater binder faktisk til epitopene på den ene siden og har en fluorescerende markør i tilfelle immunfluorescens på den annen side. Dette er et alternativ til bruk av radioaktive markører. Det spesielle ved direkte deteksjoner av immunfluorescens sammenlignet med indirekte påvisninger er at antistoffet som binder seg til epitopen til antigenet i det undersøkte materialet, samtidig er antistoffet konjugert med den fluorescerende markøren. Ytterligere antistoffer for interposisjon er ikke nødvendig for direkte påvisning. I immunfluorescens, fluorescein, som lyser under UV-lys, og fluoresceinisotiocyanat (FITC) brukes som fargestoffer å konstruere de kunstige antistoffkonjugatene. Så langt det leser litt komplisert, men direkte deteksjoner med immunfluorescens er standardmetoder for medisinsk bruk laboratoriediagnostikk for mange forskjellige medisinske problemer. Antistoffer som inneholder det fluorescerende fargestoffet, er klare for salg.
Funksjon, effekt og mål
Immunofluorescens direkte detektorer er tilgjengelige for vevsstudier for å flekker spesifikke strukturer i vev. Men de eksisterer også for enkeltceller. Det er der flowcytometri spiller en stor rolle. Og til slutt er det immunanalysene som består av faste og flytende faser. Immunfluorescensstudier av vev er viktig fremfor alt innen onkologi, dvs. medisinsk behandling av kreft. Tumorspesifikke antigener i tumorvev kan påvises direkte med immunfluorescens. Disse undersøkelsene av vevsprøver fra svulster er ofte viktige for å finne ut hvor i kroppen den eksisterende metastaser har kommet fra, eller også for å danne en dom om hvorvidt en svulst er godartet eller ondartet. Undersøkelsen av individuelle celler med immunfluorescens direkte påvisning brukes til å finne virale antigener, bakterielle antigener og andre epitoper. For eksempel lærer man om cellene er infisert av et virus og på hvilket stadium av infeksjonssyklusen cellene er. FACS (= Fluorescens-aktivert cellesortering) er en svært effektiv strømningscytometri-metode der fluorescerende merkede celler distribueres til forskjellige reagensrør, avhengig av fargetype. Denne metoden er viktig i immunologi, hematologi og infeksiologi. Immunofluorescensimmunanalyser tillater direkte påvisning av miljøgifter, genetisk modifiserte organismer og visse tilsetningsstoffer i mat. I dette eksperimentelle oppsettet er det alltid en solid og en flytende fase. En rekke patogener, Herunder AIDSforårsaker HI-virus, kan også oppdages direkte. Imidlertid når det oppdages smittsomme og autoimmune sykdommer, er målet ofte å oppdage antistoffer i stedet for antigener. Dette er forsvaret molekyler produsert av kroppens egen immunsystem. Slike deteksjoner er da ikke direkte deteksjoner i henhold til definisjonen som er presentert her, siden de fluorescerende antistoffene ikke kobles direkte til kroppens egne antigener, men til antigenene til testenheten. Disse antigenene fra forsøkssamlingen knytter seg igjen til de endogene antistoffene. Bare i spesielle deteksjons- og bekreftelsestester er direkte deteksjoner av immunfluorescens brukt til vanlige infeksjoner, for eksempel av HI virus og Chlamydia. Det er tester for mange andre sykdommer. I de fleste situasjoner er indirekte påvisning av antistoffer bedre for Smittsomme sykdommer fordi kroppen er immunsystem har en genial evne til å huske tidligere infeksjoner. I andre situasjoner utfyller direkte påvisning av antigener og indirekte påvisning av antistoffer hverandre. Sistnevnte viser at en infeksjon har skjedd før, mens førstnevnte gir mer nøyaktig informasjon om den nåværende statusen for patogenaktivitet.
Risiko, bivirkninger og farer
Med direkte påvisning av immunfluorescens, som med all medisinsk påvisning, følger to risikoer: Risikoen for et falskt positivt resultat og risikoen for et falskt negativt resultat. Falske positive resultater medfører psykologisk ubehag og veldig stor lidelse for pasienten. Derfor blir flere testprosedyrer lagt til positive resultater, spesielt når diagnosen fører til drastiske livsendringer. Faren for et falskt negativt resultat er at pasienten ikke lærer i tide om trusselen mot sin egen Helse og kanskje til og med for folkehelsen. Derfor er det bra å gjøre mye forskning og gjøre et stort antall forskjellige immunfluorescens direkte deteksjoner klare for salg og tilby dem. Sammen med andre direkte og indirekte påvisningsmetoder for sykdommer og patologier, øker dette nøyaktigheten av diagnosen. Direkte deteksjoner er basert på antistoffkonjugatet, som på den ene siden binder seg til epitopene til antigenene og på den andre siden også forårsaker fluorescens samtidig. Et slikt produkt brukes derfor bare i en type testprosedyre og brukes ikke til andre typer tester. Dette er en viktig prosessuell forskjell fra indirekte påvisning, der primære antistoffer brukes oppstrøms de fluorescerende antistoffene for epitopbinding. Antistoffkonjugatet er således egnet for forskjellige analyser. Denne prosessuelle forskjellen er forskjellig fra den medisinske forskjellen mellom indirekte påvisning av antistoffer og direkte påvisning av antigener.
