DNA-sekvense
I DNA-sekvensering brukes biokjemiske metoder for å bestemme sekvensen av nukleotider (DNA-basemolekyl med sukker og fosfat) i et DNA-molekyl. Den mest brukte metoden er Sanger-kjedeavslutningsmetoden. Siden DNA består av fire forskjellige baser, gjøres fire forskjellige tilnærminger.
Hver tilnærming inneholder DNA som skal sekvenseres, en primer (startmolekyl for sekvensering), DNA-polymerase (enzym som utvider DNA) og en blanding av alle fire nødvendige nukleotider. Imidlertid, i hver av disse fire tilnærmingene, blir en annen base kjemisk modifisert på en slik måte at den kan inkorporeres, men ikke gir et handlingspunkt for DNA-polymerasen. Dette fører da til kjedeavslutning. Denne metoden produserer DNA-fragmenter av varierende lengde, som deretter kjemisk skilles fra såkalt gelelektroforese i henhold til lengden. Den resulterende sorteringen kan oversettes til sekvensen av nukleotider i sekvensert DNA-seksjon ved å merke hver base med forskjellige fluorescerende farger.
DNA-hybridisering
DNA-hybridisering er en molekylær genetisk metode som brukes for å bevise likheten mellom to enkelt DNA-tråder av forskjellig opprinnelse. Denne metoden benytter seg av det faktum at en DNA-dobbeltstreng alltid er sammensatt av to komplementære enkeltstrenger. Jo mer like begge enkeltstrengene er til hverandre, jo flere baser danner en solid forbindelse (hydrogenbindinger) med den motsatte basen eller jo flere basepar dannes.
Ingen baseparing vil forekomme mellom seksjoner på de to DNA-strengene som har en annen basesekvens. Det relative antall forbindelser kan nå bestemmes ved å bestemme smeltepunktet der den nydannede DNA-dobbeltstrengen skilles. Jo høyere smeltepunkt, jo mer komplementære baser har dannet hydrogenbindinger til hverandre, og jo mer like er de to enkeltstrengene. Denne metoden kan også brukes til å oppdage en spesifikk basesekvens i en DNA-blanding. For dette formål kan kunstig dannede DNA-fragmenter merkes med (fluorescerende) fargestoff. Disse tjener deretter til å markere den tilsvarende basesekvensen og kan dermed gjøre den synlig.
Alle artiklene i denne serien:
