Enkelt-gen analyse er en målrettet genetisk testmetode.
Innen rammen av denne prosedyren, hvis det mistenkes en arvelig sykdom, som utløses av en enkelt endring i en gen, blir genet mistenkt som kausalt undersøkt. Dette gjøres også ofte rutinemessig som en del av screeningundersøkelser.
Indikasjoner (bruksområder)
- Diagnose av monogene sykdommer f.eks cystisk fibrose.
Fremgangsmåten
Materiell som trengs
- Heparinblod (minimum 1-2 ml)
Klargjøring av pasienten
- Ikke nødvendig
Forstyrrende faktorer
- Ingen kjent
Laboratoriemetoden
Sekvenseringsmetoden som brukes igen analyse er Sanger-metoden, også kalt kjedetermineringssyntese, der den først kommer til isolasjon av DNA fra blod. Så alt hydrogen bindinger som tjener til å holde det tostrengede DNAet sammen blir brutt. Etter oppvarming ved 94-96 ° C i ett minutt er to enkle tråder til stede. Deretter skjer den såkalte primerhybridiseringen, hvorved en primer er festet. Dette skjer ved ca. 60 ° C. En primer er et oligonukleotid (oligomerer sammensatt av noen få nukleotider) som fungerer som utgangspunkt for DNA-replikering enzymer slik som DNA-polymerase. Etter primerhybridisering foregår utvidelse der temperaturen økes til 72 ° C. Dette gjør at primeren kan feste seg til DNA-polymerasen (enzymer som syntetiserer DNA). Etter et gjennomsnitt på 30 sykluser, kan prosedyren stoppes.
Videre analyse utføres av kapillær elektroforese i automatiserte sekvensere. Resultatet kalles et elektroferogram. Dette viser forskjellige farger som indikerer basesekvensen.
Ved denne metoden kan mutasjoner som bare involverer en enkelt nukleinbase i et gen, også kjent som punktmutasjoner, oppdages.
