Fremgangsmåten
Hvis en direkte Coombs-test utføres, vil den røde blod celler blir filtrert ut av pasientens blod. Det skal testes om det er antistoffer av IgG-typen på dem, som forårsaker hemolytisk anemi eller blod gruppe inkompatibilitet i kroppen. Coombs serum inneholder antistoffer mot humane IgG-antistoffer.
Blandingen oppvarmes (inkuberes) over lengre tid. Hvis det er antistoffer på det røde blod celler, vil de klumpe seg sammen og testen vil være positiv. Den indirekte Coombs-testen består av to deler.
Målet er å bestemme antistoffer som er fritt tilstede i blodet og ikke er bundet til blodceller. Denne gangen blir den flytende delen (serum) filtrert fra pasientens blod. Først tilsettes røde blodlegemer i serumet for testen.
Hvis det er gratis antistoffer i serumet, binder disse seg til de røde blodcellene. Denne reaksjonen er ikke synlig. Bare i det andre trinnet, som i den direkte Coombs-testen, tilsettes Coombs serum med antistoffer mot humane antistoffer og oppvarmes. Hvis resultatet er positivt, blir løsningen også agglutinert.
Evalueringen
Når antistoffer kombineres med matchende Cooms-serum, bindes antistoffer av serumet (flytende del av blodet) med antistoffer fra pasienten. Antistoffer har en Y-formet struktur, noe som betyr at de alltid kan binde to bindingspartnere og dermed tverrbinde røde blodlegemer med hverandre. Dette resulterer i en stor opphopning av blodceller.
Disse klumpene blir synlige - blodet agglutinerer (klumper) og testen er positiv. Hvis pasienten ikke har noen antistoffer, forblir serumet flytende. Ingen endring kan sees - testen er negativ.
Hva er alternativene?
Et alternativ til Coombs-testen er den immunologiske ELISA-prosedyren (Enzym-linked Immunosorbent Assay), der visse antistoffer er merket med et enzym. Dette antistoffet tilsettes testløsningen. Hvis de merkede antistoffene reagerer med antistoffene i testløsningen, aktiveres det bundne enzymet og produserer et fargestoff.
Tilsvarende prøverør endrer farge - testen er positiv. I tillegg til ELISA-prosedyren er det også WESTERN-Blot, som ofte brukes som en bekreftende test for positiv ELISA.
