Immunoelektroforese brukes til laboratoriediagnostisk påvisning av monoklonal antistoffer hos en pasient blod. Monoklonalt antistoffer er avledet fra samme celle og er rettet mot de samme antigenene. Av denne grunn anses de som patologiske og, når de oppdages, tyder på sykdommer som Waldenströms sykdom.
Hva er immunelektroforese?
Immunoelektroforese brukes til laboratoriediagnostisk påvisning av monoklonal antistoffer hos en pasient blod. Ioner har forskjellig mobilitet. Denne differensielle mobiliteten danner grunnlaget for elektroferesemetoder. Disse metodene skiller forskjellige stoffer fra hverandre ved hjelp av elektriske felt og tyngdekraften. En velkjent metode fra feltet er immunoelektroferese. Dette er en kvalitativ diagnostisk prosedyre som brukes til å oppdage monoklonale antistoffer. Antistoffer er immunologisk aktive proteinstoffer av en spesifikk cellelinje. Monoklonale antistoffer alle stammer fra den samme B-lymfocytten og er følgelig rettet mot en enkelt epitop. Enhver naturlig immunrespons mot invaderende antigener tilsvarer en polyklonal respons og er således rettet mot forskjellige epitoper. En monoklonal immunrespons gir derfor bevis på patologiske kroppsprosesser. Monoklonale antistoffer binde annerledes molekyler med høy spesifisitet. Denne bindingen kan oppdages av immunelektroforese. Metoden er en kvalitativ laboratoriediagnostisk prosedyre og består av de to typene prosedyrer, serumelektroforese og immundiffusjon.
Funksjon, effekt og mål
Immunoelektroforese kombinerer metoden for serumelektroforese med immundiffusjon. Pasientens serum plasseres på en agarosegel eller celluloseacetatfilm. Et kontrollserum påføres også. Søknaden følges av elektroforetisk separasjon av prøvene. Antisera, IgG, IgA, IgM, eddiksyre for normal elektroforese og kappa, og lambda påføres mellom skillelinjene. Dette setter opp en reaksjon med antistoffene til pasientserumet, som genererer nedbørslinjer. Avhengig av antiserumet og posisjonen og formen til de enkelte linjene, kan det trekkes konklusjoner om immunoglobuliner med kappa eller lambda lette kjeder inneholdt. I tilfelle av et lambda-bånd er det frie lette kjeder av antistoffer. Ved å bruke den sjeldne IgE og IgD, gir laboratoriet ytterligere bevis som tillater presis bestemmelse av immunoglobuliner. En prosedyre med immundiffusjonselektroforese finner sted ifølge Pierre Grabar og Curtis Williams og tilsvarer en kombinasjon av agarosegelelektroforese av proteiner og en antistoffdiffusjon. Først finner agarosegelelektroforese sted. Deretter diffunderer de inneholdte antistoffene mot båndene til antigener og forårsaker derved bunnfall. Dette skal skilles fra Laurells Rocket immunoelektroforese, som tilsvarer elektroforese av proteiner i en agarosegel, som hver inneholder antistoffer ved en spesifikk konsentrasjon. Gelen inneholder en litt basisk buffer som bare tillater antigenene å migrere, og skyver det meste av antistoffene til det isoelektriske punktet ved eksponering for den litt basiske pH til de slutter å bevege seg elektroforetisk. Ved begynnelsen av en Rocket immunoelektroforese er det et overskudd av antigen, så det dannes oppløselige antigen-antistoffkomplekser. Under elektroforese oppstår ytterligere binding mellom antigener og ekstra antistoffer. Ved ekvivalenspunktet dannes immunutfellingen på denne måten, som ligner rakettlignende figurer med en høyde proporsjonal med antigenet konsentrasjon. Bunnfallets høyde måles for å evaluere analysen.
Risiko, bivirkninger og farer
Deteksjonen av monoklonale antistoffer er spesielt viktig for diagnosen myelomatose og Waldenstroms sykdom. Oppdagelsen oppnådd er en indikasjon på en ondartet degenerasjon av immunceller. Multipelt myelom tilsvarer a kreft av beinmarg karakterisert ved ondartet spredning av antistoffproduserende celler i plasmaet. Disse plasmacellene produserer antistoffer og deres fragmenter. Ondartede plasmaceller stammer alltid fra en vanlig stamcelle og er dermed genetisk identiske. De produserer monoklonale antistoffer utelukkende. Maligniteten til denne sykdommen kan tilsvare et precancerøst stadium, men kan også nå et svært ondartet stadium som er raskt dødelig uten behandling. Sykdomssymptomer skyldes den ondartede veksten av cellene eller fra antistoffene og antistofffragmentene. De vanligste symptomene inkluderer bein smerter, beinoppløsning og spontane beinbrudd. Kalsium nivåer i blod er ofte forhøyet. I tillegg legger de unormale antistoffene seg ofte i vevet og forårsaker organdysfunksjon, noe som kan føre til manifestasjoner som nyre svikt eller nedsatt blodstrøm. Waldströms sykdom er også en ondartet svulstsykdom. Mer spesifikt er det ondartet lymfom sykdom som er klassifisert som en langsomt progressiv og nesten asymptomatisk B-celle ikke-Hodgkins lymfom. I de fleste tilfeller kan unormal produksjon av monoklonalt IgM påvises i sykdommen, som skyldes aktiviteter av ondartede lymfom celler. Waldenströms sykdom ligner ekstremt myelomatose i egenskapene, men viser vanligvis et gunstigere forløp. De fleste pasienter med Waldenströms sykdom er stort sett asymptomatiske fram til diagnosen. Andre pasienter viser tidlige symptomer som ikke-spesifikk tretthet eller perifere nevropatier som følge av avsetning av monoklonalt IgM i myelin skjede. Selv små mengder IgM kan forårsake polynevropati. Hos andre pasienter, polynevropati forekommer ikke selv med høye nivåer. I tillegg er uspesifikke symptomer som feber, uønsket vekttap, eller nattesvette kan forekomme. Skjelettsmerter er også karakteristisk. På grunn av overproduksjon av IgM blir blodet hyperviskøst, slik at de ovennevnte symptomene kan være assosiert med hyperviskositetssyndrom. Dette blødningstendens manifesterer seg i de fleste tilfeller ofte neseblod, hodepine, en generell følelse av ubehag eller tåkesyn og akustiske klager. For å oppdage maligniteter av denne typen har immunoelektroferese lenge blitt en standard diagnostisk prosedyre.
